Mise au point d’un modèle cellulaire adapté à l’étude in vitro des mécanismes inflammatoires induits par Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae

cf. site web 

     Plusieurs maladies vétérinaires pour lesquelles l’umr ASTRE du CIRAD est laboratoire de référence national ou international possèdent une forte composante immuno-pathologique et aucun modèle d’animal de laboratoire n’est disponible pour les étudier. C’est le cas de certaines mycoplasmoses comme la pleuropneumonie contagieuse caprine (PPCC) qui induit une réaction inflammatoire exacerbée responsable de la destruction des tissus pulmonaires (1). Dans le cadre de ce stage, le modèle « organoïde de poumon de chèvre », composé des différents types cellulaires du poumon et de cellules immunocompétentes, sera utilisé, pour la première fois, dans l’analyse des interactions entre la bactérie Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae (Mccp), agent de la PPCC, et le système immunitaire de l’hôte.

     Plus précisemment, le tropisme de Mccp sera étudié sur des organoïdes de poumons de chèvre en cours de développement en collaboration avec Fabienne Archer de l’UMR754 IVPC (INRAE-UnivLyon1-EPHE) (2). La structure et composition cellulaire des organoïdes est analysée par microscopie confocale et en immunohistochimie sur sections après marquage au moyen d’anticorps afin de distinguer les cellules épithéliales de l’alvéole (pneumocytes de type I et II) et les épithéliales bronchiques (cellules ciliées, cellules basales, cellules sécrétrices). Ensuite, les organoïdes de poumon seront transférés sur inserts avec ajout de cellules endothéliales et de cellules immunocompétentes de l’hôte. Les cellules endothéliales et immunes caprines (macrophages, neutrophiles et lymphocytes) seront préparées au CIRAD (3). Après infection par Mccp, en l’absence ou présence de cellules immunes, la transmigration vers l’épithélium pulmonaire des phagocytes sera suivie par cytométrie en flux et immunohistochimie ainsi que par des techniques d’imagerie 3D. L’objectif est d’analyser le tropisme de Mccp et d’identifier les conditions expérimentales (phénotypes et concentrations des cellules immunes menant à une destruction de l’épithélium pulmonaire comme observé in vivo. 

Bibliographie

(1) https://www.woah.org/fr/maladie/pleuropneumonie-contagieuse-caprine/

(2) Archer F, Bobet-Erny A, Gomes M. State of the art on lung organoids in mammals. Vet Res. 2021 Jun 2;52(1):77. doi: 10.1186/s13567-021-00946-6

(3) Totté P, Bonnefois T, Manso-Silvan L. Interactions between Mycoplasma mycoides subsp. mycoides and bovine macrophages under physiological conditions. PLoS One. 2024 Jun 27;19(6):e0305851. doi: 10.1371/journal.pone.0305851

Nous recherchons un candidat intéressé par l'immunologie en général et le travail de recherche en laboratoire sur des modèles cellulaires complexes.