Optimisation des thérapies cellulaires adoptives anti-tumorales par invalidation génique de points de contrôles immunitaires intracellulaires

Depuis 2011 et l’apparition des inhibiteurs de points de contrôle immunitaires (ICI) dans l’arsenal thérapeutique anti-tumoral, ils occupent une place prépondérante dans les traitements des patients. Ces traitements visent à réactiver les lymphocytes T spécifiques des cellules tumorales. En effet au cours du développement du cancer celui-ci a pu développer des stratégies visant à activer des mécanismes de rétrocontrôles négatifs du système immunitaire. Les ICI utilisés actuellement sont des anticorps monoclonaux qui viennent bloquer des récepteurs membranaires (CTLA-4, PD-1/PDL1, LAG-3). Bien que les résultats cliniques de l’utilisation de cette approche thérapeutique aient pu changer radicalement le pronostique des patients (ie mélanome métastatique), ces traitements ne fonctionnent toutefois pas pour tous les cancers ni tous les patients.

Les stratégies de transfert cellulaire adoptif (ACT) restent une alternative prometteuse, en monothérapie ou en combinaison thérapeutique avec les ICI. Des résultats récents ont documenté l'efficacité thérapeutique de l'injection de TIL, ce qui a conduit à l'approbation par la FDA de cette stratégie chez les patients réfractaires aux ICI et aux thérapies ciblées (Rohaan MW et al., Schoenfeld AJ et al.). Cependant, bien que la thérapie par TIL ait démontré une efficacité relative dans les tumeurs solides, en particulier dans le mélanome, cette efficacité pourrait encore être grandement améliorée en associant ACT et ICI et plusieurs essais cliniques sont en cours.

Les points de contrôle immunitaire intracellulaires (iICP) sont des molécules qui régulent à la baisse les cascades de signalisation déclenchées par l'engagement du TCR (T Cell Receptor) et constituent une famille en expansion de nouvelles cibles pour les immunothérapies (Laletin V et al.). Contrairement aux points de contrôle immunitaire membranaires les iICP ne peuvent être ciblés par des anticorps monoclonaux. L’invalidation génique est une stratégie envisageable pour optimiser l’approche d’ACT (Stadtmauer EA et al.). L'inhibition de deux iICP, CBL-B et CISH, dans les TIL par un composé pharmacologique ou CRISPR/Cas9 est ainsi en cours d'évaluation dans les essais cliniques. Le profil d’expression et d’activation des iICP dans les TIL n’est pas extensivement documentée et l’implication de l’invalidation des iICP sur la biologie des lymphocytes T doit encore être pleinement caractérisée.

Le projet a pour objectif d’évaluer l'expression des iICPs par cytométrie intracellulaire et western blotting dans les TILs de mélanome et de cancers colorectaux (CRC). Les TIL et les cellules tumorales seront obtenus à partir de prélèvements tumoraux des hôpitaux de Besançon et de Nantes dans le cadre du projet SO’TIL soutenu par la ligue contre le cancer dans le cadre de l’AAP 2024 Thérapies cellulaires innovantes. Ensuite, en utilisant le système CRISPR/Cas9, l'iICP le plus approprié sera édité en fonction du cancer ciblé. Cette approche est maitrisée à RIGHT, Valentine de Castro y a réalisé sa thèse de doctorat sur l’invalidation par CRISPR/Cas9 du facteur de transcription AhR dans les lymphocytes T. La réactivité des populations de TIL éditées sera évaluée contre des lignées de cellules tumorales autologues dans le mélanome, et dans le CRC contre des lignées de cellules allogéniques d'abord et avec des cellules cancéreuses autologues ou tumoroïdes lorsque cela est possible.  

-Rohaan MW, Borch TH, van den Berg JH, Met Ö, Kessels R, Geukes Foppen MH, Stoltenborg Granhøj J, Nuijen B, Nijenhuis C, Jedema I, et al. Tumor-Infiltrating Lymphocyte Therapy or Ipilimumab in Advanced Melanoma. N Engl J Med. 2022;387(23):2113–2125. doi:10.1056/NEJMoa2210233

-Schoenfeld AJ, Lee SM, Doger De Spéville B, Gettinger SN, Häfliger S, Sukari A, Papa S, Rodríguez-Moreno JF, Graf Finckenstein F, Fiaz R, et al. Lifileucel, an Autologous Tumor-Infiltrating Lymphocyte Monotherapy, in Patients with Advanced Non–Small Cell Lung Cancer Resistant to Immune Checkpoint Inhibitors. Cancer Discovery. 2024;14(8):1389–1402. doi:10.1158/2159-8290.CD-23-1334

-Stadtmauer EA, Fraietta JA, Davis MM, Cohen AD, Weber KL, Lancaster E, Mangan PA, Kulikovskaya I, Gupta M, Chen F, et al. CRISPR-engineered T cells in patients with refractory cancer. Science. 2020;367(6481):eaba7365. doi:10.1126/science.aba7365

-Laletin V, Bernard P-L, Costa Da Silva C, Guittard G, Nunes JA. Negative intracellular regulators of T-cell receptor (TCR) signaling as potential antitumor immunotherapy targets. J Immunother Cancer. 2023;11(5):e005845. doi:10.1136/jitc-2022-005845

Université Marie et Louis Pasteur à BESANCON

Laboratoire RIGHT

- connaissances et compétences requises

Connaissances requises : Biologie des lymphocytes T – Immunologie des cancers - Système CRISPR/Cas – Signalisation cellulaire à partir de récepteurs membranaires

Compétences requises : Culture cellulaire de lignées - Culture de lymphocyte T - Invalidation génique par CRISPR/Cas – Cytométrie en flux - Western Blotting